在生物制藥領(lǐng)域,層析純化是關(guān)鍵步驟,親和層析介質(zhì)循環(huán)使用次數(shù)直接影響分離提純效果。根據(jù)不同產(chǎn)品特性和物料性質(zhì),介質(zhì)壽命均不相同。
本文以金屬螯合鎳親和介質(zhì)為例,通過金屬螯合親和介質(zhì)的原理與使用方式,來檢測介質(zhì)壽命。金屬螯合親和介質(zhì)捕獲蛋白質(zhì)表面的氨基酸,分離出對金屬離子有吸附作用的多肽、蛋白和核苷酸。針對其純化原理,研究介質(zhì)壽命驗證方法與清洗檢測,為研究不同用途的層析介質(zhì)壽命提供思路與數(shù)據(jù)支持。
介質(zhì)壽命驗證是藥品研發(fā),尤其是生物制品的重點關(guān)注內(nèi)容。企業(yè)在做介質(zhì)壽命驗證時,建議采用等比例縮小純化規(guī)模,確定每步純化所用介質(zhì)的使用次數(shù),確保親和層析介質(zhì)壽命在使用期限內(nèi)使用,介質(zhì)符合生產(chǎn)需求,防止交叉污染,保障產(chǎn)品的質(zhì)量合格。
親和層析介質(zhì)在每次使用時,未被洗脫和流穿的物質(zhì)或雜質(zhì)會吸附在填料上,需要采用特定的清洗和再生程序?qū)游鼋橘|(zhì)進行清洗、再生、保存,以恢復(fù)介質(zhì)開始的狀態(tài)。長期使用的介質(zhì),會逐漸失去效力,如清洗后污染物殘留量、介質(zhì)使用參數(shù)變化、產(chǎn)品重要指標(純度)和收率均不在控制范圍之內(nèi),則說明介質(zhì)的壽命已到期。
親和層析是一種吸附層析,抗原(或抗體)和相應(yīng)的抗體(或抗原)發(fā)生特異性結(jié)合,而這種結(jié)合在一定的條件下又是可逆的。所以將抗原(或抗體)固相化后,就可以使存在液相中的相應(yīng)抗體(或抗原)選擇性地結(jié)合在固相載體上,借以與液相中的其他蛋白質(zhì)分開,達到分離提純的目的。
與產(chǎn)品實際生產(chǎn)的SOP作對比,如不在SOP控制范圍內(nèi),則說明介質(zhì)應(yīng)該更換了,只有對親和層析介質(zhì)進行及時更換,才能確保生物制品質(zhì)量。
本次研究結(jié)果顯示,TOC檢測值范圍在22.700~262.000ppb之間,RSD為77.027%;pH檢測值范圍在5.400~6.900之間,RSD為7.103%;內(nèi)毒素檢測值范圍在0.600~1.100EU/mL之間,RSD為9.443%;蛋白未檢出,電導(dǎo)均<0.25μs/cm;TOC洗脫峰圖波動明顯,pH洗脫峰圖稍有波動,但都電導(dǎo)洗脫峰圖相對平穩(wěn)。
結(jié)果表明,雖然TOC和pH峰圖存在一定波動,但其檢測值均處于正常標準范圍內(nèi),另外內(nèi)毒素作為輔助參考指標,zui高值達到1.100EU/mL,已超出標準范圍,但檢測難免存在誤差,經(jīng)計算內(nèi)毒素平均值僅為0.967EU/mL,符合標準范圍。